A clonagem de genes em eucariotos envolve a transferência de um gene específico para um vetor de clonagem, a introdução desse vetor em uma célula hospedeira e a seleção das células que incorporam o gene-alvo. Esse processo é fundamental para a pesquisa científica, para a produção de proteínas recombinantes e para outras aplicações biotecnológicas. Um dos desafios no isolamento de genes eucariotos para clonagem é o fato de estes serem geralmente interrompidos por sequências intervenientes. Dentre as técnicas disponíveis, a RT-PCR (transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase) é a mais utilizada nessa situação. Sobre essa técnica, assinale o que for correto:
- A O transcrito primário contém as sequências intervenientes, ou não codificantes (éxons). O mRNA maduro irá conter apenas as sequências que de fato codificam aminoácidos (íntrons).
- B A enzima transcriptase reversa, utilizada na técnica de RT-PCR, sintetiza cDNA a partir de moléculas de mRNA presentes na amostra. Este cDNA será, então, utilizado como molde pela DNA polimerase.
- C Vetores contendo as sequências originais dos genes eucarióticos podem ser utilizados para a clonagem em bactérias, pois estas possuem os elementos celulares necessários para realizar o processamento (splicing) dos transcritos primários provenientes desses genes.
- D Na RT-PCR, a DNA polimerase converte mRNA em cDNA, na presença de transcriptase reversa, gerando inúmeras cópias da sequência codificante do gene de interesse.